ALP堿性磷酸酶染色（偶氮偶聯(lián)法）

服務(wù)介紹：

堿性磷酸酶是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉(zhuǎn)換成5’-OH末端。但它不是單一的酶，而是一組同工酶。已發(fā)現(xiàn)有 ALP1、ALP2、ALP3、ALP4、ALP5與 ALP6六種同工酶。其中第1、 2、6 種均來自肝臟，第3種來自骨細胞，第4種產(chǎn)生于胎盤及癌細胞，而第5種則來自小腸絨毛上皮與成纖維細胞。正常的骨代謝是通過成骨細胞生長與破骨細胞建立骨吸收而維持平衡。成骨細胞的標記酶是堿性磷酸酶（ALP），酶活性的變化是成骨細胞生理現(xiàn)象的重要標志。在骨代謝研究領(lǐng)域被用作骨形成重要指標之一。

本實驗采用偶氮偶聯(lián)法來顯示堿性磷酸酶活性，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下，細胞內(nèi)堿性磷酸酶可使萘酚AS-BI磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色（藍色）產(chǎn)物，以此證明酶的定位。

實驗大體流程：

骨組織PFA4℃固定保存一周內(nèi)（24h-48h最佳）——骨組織用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣——脫水浸蠟包埋石蠟切片——石蠟切片脫蠟至水——提前配制過濾的ALP染色液染色——烘箱烤片——中性樹膠封片。

結(jié)果判讀：

骨組織沿骨膜內(nèi)整齊排列的矮柱狀成骨細胞呈藍色，軟骨處呈藍色，骨小梁邊緣呈藍色，細胞核呈紅色。

其他軟組織含堿性磷酸酶的細胞呈藍色，細胞核呈紅色。

送樣運輸要求：

1、做ALP染色的組織需要用PFA 4℃固定保存運輸，固定一周內(nèi)脫水包埋切片染色。室溫固定數(shù)小時就會影響酶活，4℃固定超過一周也會影響酶活，導(dǎo)致陽性減弱甚至丟失。

2、染ALP的骨組織需要使用我司EDTA脫鈣液4℃低溫脫鈣。其他脫鈣液脫鈣的組織，不保證染色結(jié)果。用酸性脫鈣液脫鈣的骨組織，酶失活陽性丟失。建議在我司進行骨組織的全套脫鈣制片和染色。

3、不脫鈣骨組織前期樣本制片處理方式對ALP酶活影響較大，不脫鈣骨組織切片和切磨片目前不建議做此染色。

ALP堿性磷酸酶染色（偶氮偶聯(lián)法）